ساخت و کلونینگ وکتور بیانی نوترکیب حاوی ژن cd۲۰ انسانی با هدف ایمونوتراپی برای لنفومای غیر هوجکین

چکیده مقدمه: لنفومای غیرهاجکینی (nhl) سرطانی است که در لنفوسیت ها رخ می دهد. درمان اصلی nhl شیمی درمانی و پرتودرمانی می باشد. امروزه ایمونوتراپی یک روش درمانی امیدوارکننده در درمان انواعی از سرطان هاست که برخلاف روش های قبلی از اختصاصیت بالایی برخوردار است. اندازه بزرگ آنتی بادی ها مانع از نفوذ مؤثر آن ها در بافت توموری می شود. در حالی که نانوبادی ها به دلیل سایز کوچک شان وارد بافت و به اپی توپ ها متصل می شوند. cd20 یک پروتئین در سطح سلول های b می باشد. بیان بالای cd20 در لمفومای غیرهاجکینی و داشتن اپی توپ خارج سلولی تشخیص داده شده با آنتی بادی های مختلف این پروتئین را هدف مناسبی برای ایمونوتراپی با آنتی بادی مونوکلونال ساخته است. هدف از این مطالعه، طراحی و کلونینگ وکتور بیانی نوترکیب حاوی لوپ خارج سلولی cd20 انسانی، ناحیه لولا و fc ایمونوگلوبین شتر می باشد. نویسنده مسئول: دکتر مجتبی طهمورث پور دانشکده کشاورزی دانشگاه فردوسی مشهد مشهد - ایران تلفن: 9151159911 98+ پست الکترونیکی: [email protected] روش کار: در این مطالعه، ما قطعه ای شامل لوپ خارج سلولی cd20 انسانی و نواحی لولا و fc ایمونوگلوبین g شتری را ساختیم. سپس دو ناحیه برشی آنزیم های محدودالاثر hindiii و xho1 و 6 اسید آمینه هیستیدین جهت خالص سازی به قطعه اضافه شد. کدون پایان در انتهای توالی قرار گرفت. توالی کد کننده ی مهندسی شده توسط شرکت genray چین سنتز و برای دست یابی به وکتور بیانی نوترکیب درون وکتور بیانی pcdna3.1+ الحاق گردید. جهت تأیید واکنش لیگاسیون، colony pcr، توالی یابی و هضم انجام شد. نتایج: نتایج کلونی pcr، یک قطعه به طول 1132 kb را نشان داد. همچنین تعیین توالی و هضم صحت واکنش الحاق را تأیید کرد. نتیجه گیری: ما به یک pcdna3.1+ نوترکیب حاوی ژن hcd20 به عنوان یک ناقل بیانی کارآمد در بیان پـروتئین نوترکیـب در سلول پستاندار دست یافتیم که می تواند جهت تولید آنتی بادی مونوکلونال علیه cd20 انسانی استفاده شود.